烏孜別克族普遍戴花帽，婦女常在花帽外加戴頭巾。男子多穿斜領、右衽、無紐扣、長可及膝的長袍，系三角繡花腰帶;喜歡戴耳環、戒指、鐲子、項鏈等裝飾物。通常穿皮鞋或皮靴，外加淺幫套鞋。喜食牛、羊、馬肉及其乳製品，一日三餐幾乎離不開囊和奶茶。
民居形式多樣，在新疆南部，多為土木結構、平頂而稍有傾斜的長方形土房;在新疆北部，與維吾爾族基本類同，也採用土木結構，頂覆泥草，稍有坡度。在牧區，冬天多住固定土房或木房，其他季節則住氈房。
舊時婚姻多由父母包辦，近親結婚普遍。現在已基本實行戀愛自由、婚姻自主、但大多要徵求父母意見。男孩7歲時要舉行割禮。實行無棺土葬，強調速葬、簡葬。主要節日有聖紀節、肉孜節、古爾邦節等。
忌食豬肉、狗肉、驢肉、騾肉和自死畜禽肉及動物血。用餐時，嚴禁脫帽。不能在客人面前咳嗽、擤鼻涕或者大聲說話。
交談時忌諱伸懶腰、打哈欠、挖鼻孔、吐痰、咳嗽、打嗝、放屁等。
禁止在公共場所光著上身，不准僅穿褲衩、背心串門。不得在清真寺和墓地周圍吐痰、嘔吐、倒垃圾、潑髒水和大小便。